BACKGROUND: The global fight against tuberculosis (TB) continues. The timely prescription of anti-TB therapy requires the rapid and effective identification of the causative agent, the Mycobacterium tuberculosis complex. Molecular genetic testing is used to detect the pathogen’s DNA and to provide results on the day the biological material is submitted to a laboratory. The Center for Strategic Planning and Management of Biomedical Health Risks has developed an AmpliTest® MBT reagent kit for the qualitative and quantitative determination of M. tuberculosis complex DNA in samples of human biological material and bacterial cultures using polymerase chain reaction.
AIM: The aim of the study was to evaluate the efficacy of the new AmpliTest® MBT reagent kit compared to a similarly designed kit approved in Russia as an in vitro diagnostic medical device, based on pre-approval clinical studies.
MATERIALS AND METHODS: A total of 575 samples were evaluated, including 475 biological samples obtained from patients with pulmonary and extrapulmonary tuberculosis: sputum, n =115; bronchoalveolar lavage, n =109; biopsy (surgical material), n =145; urine, n =106; and 100 bacterial culture samples. All samples, except cultures, were processed with NALC-NaOH reagents to obtain precipitates, each of which was divided into four equal parts and analyzed using three versions of the AmpliTest® MBT kit and the reference AmpliTub-RV kit (Syntol LLC). Amplification was performed using CFX96, DTprime, Applied Biosystems QuantStudio 5, Rotor-Gene Q manually or with software to automatically record results. The efficacy parameters of the AmpliTest® MBT kit were calculated, i.e. positive and negative concordance of results (with 95% confidence interval). Linear correlation coefficient (R2) was determined for quantitative results.
RESULTS: There was complete concordance between the results of the qualitative determination of M. tuberculosis complex DNA in the samples tested using the new kit and the reference kit. The efficacy rates of the new AmpliTest® MBT kit were 100% for all samples. The linear correlation coefficients (R2) of the quantitative determinations of M. tuberculosis complex DNA were greater than 0.9.
CONCLUSION: Clinical studies of the new AmpliTest® MBT reagent kit demonstrated its high efficiency in the qualitative and quantitative determination of M. tuberculosis complex DNA in samples of human biological material and bacterial cultures compared to the reference kit.
Обоснование. Борьба с туберкулёзом продолжается во всём мире. Для своевременного назначения больному противотуберкулёзной терапии необходимо быстро и эффективно выявлять возбудитель — Mycobacterium tuberculosis complex. Для этого используют молекулярно-генетические методы исследования, которые позволяют обнаружить ДНК возбудителя и получить результаты в день сдачи биологического материала в лабораторию. В Центре стратегического планирования и управления медико-биологическими рисками здоровью был разработан набор реагентов «АмплиТест® МБТ» на основе полимеразной цепной реакции для обнаружения и количественного определения ДНК М. tuberculosis complex в образцах биологического материала человека и бактериальных культурах.
Цель — оценка эффективности нового набора реагентов «АмплиТест® МБТ» в сравнении с набором, аналогичным по назначению и зарегистрированным в России как медицинское изделие для диагностики in vitro , по результатам дорегистрационных клинических испытаний.
Материалы и методы. Исследовано 575 образцов — 475 образцов биологического материала от пациентов с туберкулёзом лёгких и внелёгочной локализации (мокрота, n =115; бронхоальвеолярный лаваж, n =109; биоптат (операционный материал), n =145; моча, n =106), а также 100 образцов бактериальных культур. Все образцы, кроме культур, обрабатывали с помощью реагентов n ALC- n aOH с получением осадков, каждый из которых делили на 4 равные части и анализировали с использованием трёх форм комплектации набора «АмплиТест® МБТ» и набора сравнения «Амплитуб-РВ» (ООО «Синтол»). Амплификацию проводили на СFX96, ДТпрайм, Applied Biosystems QuantStudio 5, Rotor-Gene Q вручную или с помощью программного обеспечения для автоматического учёта результатов. Рассчитывали показатели эффективности набора «АмплиТест® МБТ» — положительное и отрицательное соответствие результатов (с 95% доверительным интервалом). Для количественных результатов определяли коэффициент линейной корреляции (R2).
Результаты. Получено полное совпадение результатов качественного определения ДНК М. tuberculosis complex в исследуемых образцах при использовании нового набора и набора сравнения. Поэтому показатели эффективности нового набора «АмплиТест® МБТ» составили 100% для всех образцов. Коэффициенты линейной корреляции (R2) количественных результатов ДНК М. tuberculosis complex были выше 0,9.
Заключение. В результате проведённых клинических испытаний нового набора реагентов «АмплиТест® МБТ» показана его высокая эффективность в отношении качественного и количественного определения ДНК М. tuberculosis complex в образцах биологического материала человека и бактериальных культурах относительно набора сравнения.