


Том 69, № 9 (2024)
- Год: 2024
- Выпуск опубликован: 15.09.2024
- Статей: 5
- URL: https://kld-journal.fedlab.ru/0869-2084/issue/view/9905
Оригинальные исследования
Антибиотикорезистентность облигатно-анаэробных бактерий, выделенных от пациентов колопроктологического профиля
Аннотация
Обоснование. Инфекции, вызванные анаэробными бактериями, несут высокий риск для жизни, часто протекают в тяжёлой форме и опасны для пациентов с сопутствующими заболеваниями. Несмотря на это, в рутинной практике микробиологических лабораторий обычно анаэробов не культивируют и не идентифицируют, редко проводят определение чувствительности облигатно-анаэробных бактерий к антибиотикам. В то же время в мировой практике отмечается рост антибиотикорезистентности, в том числе и среди анаэробных бактерий.
Цель — изучение чувствительности этиологически значимых видов облигатно-анаэробных бактерий, выделенных от пациентов колопроктологического профиля из различных регионов Российской Федерации.
Материалы и методы. В многоцентровое проспективное неконтролируемое исследование включены этиологически значимые облигатно-анаэробные бактерии, выделенные от пациентов колопроктологического профиля из 65 регионов Российской Федерации, с последующей оценкой чувствительности к антибиотикам в соответствии с нормативными документами, применяемыми в Российской Федерации.
Результаты. В результате проведённого исследования собрана коллекция из 1200 штаммов облигатно-анаэробных бактерий, относящихся к 123 видам. В анализ включены результаты тестирования чувствительности 430 штаммов бактерий, возбудителей анаэробных инфекций в колопроктологии, из них бактерии рода Bacteroides (n =202), рода Parabacteroides (n =22), Phocaeicola vulgatus (n =104), рода Prevotella (n =11), Clostridium perfringens (n =91). Среди штаммов выявлена резистентность до 77,3% к метронидазолу, до 72,7% — к клиндамицину, до 62,5% — к меропенему, до 8,79% — к ванкомицину.
Заключение. Мониторинг резистентности к антимикробным препаратам облигатно-анаэробных бактерий, представляющих угрозу распространения антибиотикорезистентных штаммов, позволяет снизить уровень распространения резистентности, а также персонализировать протоколы антимикробной терапии и профилактики пациентов с целью снижения стоимости лечения и времени пребывания пациента в стационаре за счёт быстрого перехода с эмпирической на этиотропную терапию.



Результаты клинических испытаний нового отечественного набора реагентов на основе полимеразной цепной реакции для качественного и количественного определения ДНК возбудителя туберкулёза in vitro
Аннотация
Обоснование. Борьба с туберкулёзом продолжается во всём мире. Для своевременного назначения больному противотуберкулёзной терапии необходимо быстро и эффективно выявлять возбудитель — Mycobacterium tuberculosis complex. Для этого используют молекулярно-генетические методы исследования, которые позволяют обнаружить ДНК возбудителя и получить результаты в день сдачи биологического материала в лабораторию. В Центре стратегического планирования и управления медико-биологическими рисками здоровью был разработан набор реагентов «АмплиТест® МБТ» на основе полимеразной цепной реакции для обнаружения и количественного определения ДНК М. tuberculosis complex в образцах биологического материала человека и бактериальных культурах.
Цель — оценка эффективности нового набора реагентов «АмплиТест® МБТ» в сравнении с набором, аналогичным по назначению и зарегистрированным в России как медицинское изделие для диагностики in vitro , по результатам дорегистрационных клинических испытаний.
Материалы и методы. Исследовано 575 образцов — 475 образцов биологического материала от пациентов с туберкулёзом лёгких и внелёгочной локализации (мокрота, n =115; бронхоальвеолярный лаваж, n =109; биоптат (операционный материал), n =145; моча, n =106), а также 100 образцов бактериальных культур. Все образцы, кроме культур, обрабатывали с помощью реагентов n ALC- n aOH с получением осадков, каждый из которых делили на 4 равные части и анализировали с использованием трёх форм комплектации набора «АмплиТест® МБТ» и набора сравнения «Амплитуб-РВ» (ООО «Синтол»). Амплификацию проводили на СFX96, ДТпрайм, Applied Biosystems QuantStudio 5, Rotor-Gene Q вручную или с помощью программного обеспечения для автоматического учёта результатов. Рассчитывали показатели эффективности набора «АмплиТест® МБТ» — положительное и отрицательное соответствие результатов (с 95% доверительным интервалом). Для количественных результатов определяли коэффициент линейной корреляции (R2).
Результаты. Получено полное совпадение результатов качественного определения ДНК М. tuberculosis complex в исследуемых образцах при использовании нового набора и набора сравнения. Поэтому показатели эффективности нового набора «АмплиТест® МБТ» составили 100% для всех образцов. Коэффициенты линейной корреляции (R2) количественных результатов ДНК М. tuberculosis complex были выше 0,9.
Заключение. В результате проведённых клинических испытаний нового набора реагентов «АмплиТест® МБТ» показана его высокая эффективность в отношении качественного и количественного определения ДНК М. tuberculosis complex в образцах биологического материала человека и бактериальных культурах относительно набора сравнения.



Сравнение эффективности молекулярных тестов на основе изотермической амплификации и полимеразной цепной реакции для детекции генов карбапенемаз при нозокомиальной пневмонии
Аннотация
Обоснование. Антибиотикорезистентность возбудителей нозокомиальной пневмонии (НП), в первую очередь, их устойчивость к карбапенемам, представляет серьёзную проблему для здравоохранения. Для своевременного назначения эффективной антимикробной терапии требуются новые быстрые и чувствительные методы диагностики. Разработка и внедрение диагностических тестов на основе молекулярных методов, включая полимеразную цепную реакцию (ПЦР) и перспективные технологии изотермической амплификации, позволит значительно сократить время получения результатов и повысить эффективность выявления возбудителей НП, обладающих генами карбапенемаз.
Цель — проведение сравнительной оценки эффективности нового теста на основе петлевой изотермической амплификации (LAMP) для выявления генов карбапенемаз групп NDM, OXA-48 и KPC, используемых в практике лабораторной диагностики тестов на основе полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме реального времени при применении их в диагностике нозокомиальных инфекций нижних дыхательных путей, в том числе нозокомиальной пневмонии.
Материалы и методы. В исследование включён 141 образец биоматериала из нижних дыхательных путей от 107 пациентов с нозокомиальной инфекцией нижних дыхательных путей (нозокомиальной пневмонией и/или гнойным трахеобронхитом). Биоматериал представлял из себя аспират из трахеи (ТА, n=78), бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ, n=29) и мокроту (n=34). Нуклеиновые кислоты выделяли с использованием набора «АмплиТест® РИБО-преп». Гены NDM, OXA-48 и KPC анализировали с помощью разработанного набора реагентов «АмплиТест® CP NDM/OXA-48/KPC LAMP» на основе метода петлевой изотермической амплификации. Для сравнения результатов применяли метод ПЦР в режиме «реального времени» с использованием наборов реагентов «АмплиСенс® MDR MBL-FL» и «АмплиСенс® MDR KPC/OXA-48-FL».
Результаты. Получены совпадающие результаты выявления генов карбапенемаз групп NDM, OXA-48 и KPC в образцах биоматериала из нижних дыхательных путей при использовании нового теста на основе изотермической амплификации и с помощью ПЦР-тестов для всех исследованных образцов. С помощью критерия TTP (Time to positivity — время до положительного результата) показано ускоренное время получения результата LAMP в сравнении с ПЦР. С помощью дополнительных ПЦР-тестов были определены грамотрицательные микроорганизмы, присутствующие в исследуемых образцах (как в индивидуальной, так и в смешанной форме).
Заключение. Согласно полученным результатам, эффективность выявления генов карбапенемаз указанных групп с помощью нового теста на основе LAMP не уступает эффективности их выявления с помощью ранее внедрённых в практику ПЦР-тестов.



Испытания разработанного набора реагентов для выявления возбудителей кишечных инфекций методом изотермической амплификации ДНК
Аннотация
Обоснование. Изотермическая петлевая амплификация LAMP (Loop-Mediated Isothermal Amplification) — перспективный для диагностики инфекционных заболеваний метод, имеющий высокий потенциал перехода к формату тестов «у постели больного». Он применяется для обнаружения широкого спектра возбудителей инфекционных заболеваний, однако подобные тесты для выявления возбудителей кишечных инфекций в Российской Федерации практически отсутствуют.
Цель — испытания диагностического набора реагентов для выявления ДНК возбудителей кишечных инфекций Shigella spp., энтероинвазивных E. coli, Salmonella spp., термофильных Campylobacter и кишечных аденовирусов группы F методом LAMP.
Материалы и методы. Использовали в качестве мишеней для амплификации фрагменты генов ipaH Shigella, invA Salmonella, CJE0832 кампилобактерий C. jejuni и C. coli, гена белка гексона аденовируса F 40. Клинические образцы получали от пациентов с характерными симптомами диареи и от пациентов без симптомов, всего 254 образца. Для приготовления экстракта кала готовили 10% суспензию в фосфатно-солевом буфере, осаждали твёрдые частицы. Для выделения ДНК из экстрактов использовали наборы реагентов «АмплиТест® Рибо-Преп» (РУ № РЗН 2020-12985, 22.12.2020) и «АмплиТест® Магно-Сорб-Комбо» (РУ № РЗН 2022_19200, 21.12.2022) производства ФГБУ «ЦСП» ФМБА России. Результаты амплификации детектировали с использованием специфических флуоресцирующих зондов, амплификацию проводили в мультиплексном формате с использованием двух смесей, первая из которых позволяет выявлять ДНК Shigella и EIEC, Campylobacter и ВКО, а вторая — ДНК аденовирусов группы F и Salmonella.
Результаты. Аналитическую чувствительность оценивали на модельных образцах биоматериала, содержащих ДНК целевых мишеней с известной концентрацией. Показано, что ДНК Shigella, EIEC, Salmonella, Campylobacter и аденовирусов группы F воспроизводимо выявляется в концентрации не менее 5×103 копий/мл (общее количество повторов n =60). Cпецифичность подтверждена на панели ДНК штаммов аденовирусов различных типов и ДНК бактериальных штаммов. При исследовании 254 клинических образцов показано совпадение результатов, полученных разработанным протоколом на основе LAMP и методом ПЦР (набор сравнения «АмплиСенс® ОКИ-скрин-FL»). Диагностическая чувствительность LAMP протокола составила не менее 92,6%, специфичность — не менее 98,2% с учётом доверительной вероятности ( p =0,95). Высокие аналитические и диагностические характеристики разработанного набора реагентов «АмплиТест® OKI LAMP» были подтверждены при проведении клинико-лабораторных испытаний, набор зарегистрирован в качестве медицинского изделия для диагностики in vitro (РУ РЗН 2024/23503 от 04.09.2024).
Заключение. Разработанный набор реагентов на основе LAMP позволяет выявлять кишечные патогены за время, не превышающее один час, и имеет аналитические и диагностические характеристики, сравнимые с ПЦР.



Краткие сообщения
Создание депозитария образцов ротовой жидкости. Опыт биобанка Уральского государственного медицинского университета
Аннотация
Биобанк — это уникальная платформа для современных прикладных и фундаментальных биомедицинских исследований. Данное подразделение занимается не только хранением биологических образцов, но и систематизацией клинической, лабораторной информации по каждой пробе. В 2023 г. было принято решение сформировать биобанк на базе Центральной научно-исследовательской лаборатории Уральского государственного медицинского университета. Для начала было необходимо выбрать один тип биоматериала для создания коллекции и ассоциированной с ней информации. Поскольку нашим коллективом длительное время изучались биомаркеры ротовой жидкости, было принято решение создать первую коллекцию из образцов указанного биоматериала.
Цель настоящей работы — представление опыта организации университетского биобанка на основе создания коллекции образцов ротовой жидкости. В статье рассматриваются основные этапы создания и функционирования биобанка, описываются методы пробоподготовки ротовой жидкости, а также приводится статистика собранных коллекций. На сегодняшний день преобладающая часть депозитария состоит из образцов ротовой жидкости условно здоровых пациентов и пациентов с различной патологией. На биоматериале из собранных коллекций биобанка выполнялись исследования по поиску прогностических биомаркеров различных патологических состояний.
Таким образом, университетский биобанк — это возможность для сотрудников университета, которая поможет повысить качество и воспроизводимость научно-исследовательских работ и клинико-экспериментальных проектов.


