Открытый доступ Открытый доступ  Доступ закрыт Доступ предоставлен  Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Том 69, № 9 (2024)

Обложка

Весь выпуск

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Оригинальные исследования

Антибиотикорезистентность облигатно-анаэробных бактерий, выделенных от пациентов колопроктологического профиля

Мелкумян А.Р., Ачкасов С.И., Шафикова А.А., Чистякова Д.А., Спивак М.В., Орлова О.Е., Гордеева С.А., Хамцова Ж.В., Ветохина А.В.

Аннотация

Обоснование. Инфекции, вызванные анаэробными бактериями, несут высокий риск для жизни, часто протекают в тяжёлой форме и опасны для пациентов с сопутствующими заболеваниями. Несмотря на это, в рутинной практике микробиологических лабораторий обычно анаэробов не культивируют и не идентифицируют, редко проводят определение чувствительности облигатно-анаэробных бактерий к антибиотикам. В то же время в мировой практике отмечается рост антибиотикорезистентности, в том числе и среди анаэробных бактерий.

Цель — изучение чувствительности этиологически значимых видов облигатно-анаэробных бактерий, выделенных от пациентов колопроктологического профиля из различных регионов Российской Федерации.

Материалы и методы. В многоцентровое проспективное неконтролируемое исследование включены этиологически значимые облигатно-анаэробные бактерии, выделенные от пациентов колопроктологического профиля из 65 регионов Российской Федерации, с последующей оценкой чувствительности к антибиотикам в соответствии с нормативными документами, применяемыми в Российской Федерации.

Результаты. В результате проведённого исследования собрана коллекция из 1200 штаммов облигатно-анаэробных бактерий, относящихся к 123 видам. В анализ включены результаты тестирования чувствительности 430 штаммов бактерий, возбудителей анаэробных инфекций в колопроктологии, из них бактерии рода Bacteroides (n =202), рода Parabacteroides (n =22), Phocaeicola vulgatus (n =104), рода Prevotella (n =11), Clostridium perfringens (n =91). Среди штаммов выявлена резистентность до 77,3% к метронидазолу, до 72,7% — к клиндамицину, до 62,5% — к меропенему, до 8,79% — к ванкомицину.

Заключение. Мониторинг резистентности к антимикробным препаратам облигатно-анаэробных бактерий, представляющих угрозу распространения антибиотикорезистентных штаммов, позволяет снизить уровень распространения резистентности, а также персонализировать протоколы антимикробной терапии и профилактики пациентов с целью снижения стоимости лечения и времени пребывания пациента в стационаре за счёт быстрого перехода с эмпирической на этиотропную терапию.

Клиническая лабораторная диагностика. 2024;69(9):175-185
pages 175-185 views

Результаты клинических испытаний нового отечественного набора реагентов на основе полимеразной цепной реакции для качественного и количественного определения ДНК возбудителя туберкулёза in vitro

Микулович Ю.Л., Зайцева А.И., Лазебный С.В., Плеханова М.А., Смердин С.В., Шипулин Г.А.

Аннотация

Обоснование. Борьба с туберкулёзом продолжается во всём мире. Для своевременного назначения больному противотуберкулёзной терапии необходимо быстро и эффективно выявлять возбудитель — Mycobacterium tuberculosis complex. Для этого используют молекулярно-генетические методы исследования, которые позволяют обнаружить ДНК возбудителя и получить результаты в день сдачи биологического материала в лабораторию. В Центре стратегического планирования и управления медико-биологическими рисками здоровью был разработан набор реагентов «АмплиТест® МБТ» на основе полимеразной цепной реакции для обнаружения и количественного определения ДНК М. tuberculosis complex в образцах биологического материала человека и бактериальных культурах.

Цель — оценка эффективности нового набора реагентов «АмплиТест® МБТ» в сравнении с набором, аналогичным по назначению и зарегистрированным в России как медицинское изделие для диагностики in vitro , по результатам дорегистрационных клинических испытаний.

Материалы и методы. Исследовано 575 образцов — 475 образцов биологического материала от пациентов с туберкулёзом лёгких и внелёгочной локализации (мокрота, n =115; бронхоальвеолярный лаваж, n =109; биоптат (операционный материал), n =145; моча, n =106), а также 100 образцов бактериальных культур. Все образцы, кроме культур, обрабатывали с помощью реагентов n ALC- n aOH с получением осадков, каждый из которых делили на 4 равные части и анализировали с использованием трёх форм комплектации набора «АмплиТест® МБТ» и набора сравнения «Амплитуб-РВ» (ООО «Синтол»). Амплификацию проводили на СFX96, ДТпрайм, Applied Biosystems QuantStudio 5, Rotor-Gene Q вручную или с помощью программного обеспечения для автоматического учёта результатов. Рассчитывали показатели эффективности набора «АмплиТест® МБТ» — положительное и отрицательное соответствие результатов (с 95% доверительным интервалом). Для количественных результатов определяли коэффициент линейной корреляции (R2).

Результаты. Получено полное совпадение результатов качественного определения ДНК М. tuberculosis complex в исследуемых образцах при использовании нового набора и набора сравнения. Поэтому показатели эффективности нового набора «АмплиТест® МБТ» составили 100% для всех образцов. Коэффициенты линейной корреляции (R2) количественных результатов ДНК М. tuberculosis complex были выше 0,9.

Заключение. В результате проведённых клинических испытаний нового набора реагентов «АмплиТест® МБТ» показана его высокая эффективность в отношении качественного и количественного определения ДНК М. tuberculosis complex в образцах биологического материала человека и бактериальных культурах относительно набора сравнения.

Клиническая лабораторная диагностика. 2024;69(9):186-197
pages 186-197 views

Сравнение эффективности молекулярных тестов на основе изотермической амплификации и полимеразной цепной реакции для детекции генов карбапенемаз при нозокомиальной пневмонии

Данилов Д.И., Глущенко Е.Е., Савочкина Ю.А., Стрелкова Д.А., Рачина С.А., Гасанова Д.Р., Федина Л.В., Сычев И.Н., Ларин Е.С., Шипулин Г.А.

Аннотация

Обоснование. Антибиотикорезистентность возбудителей нозокомиальной пневмонии (НП), в первую очередь, их устойчивость к карбапенемам, представляет серьёзную проблему для здравоохранения. Для своевременного назначения эффективной антимикробной терапии требуются новые быстрые и чувствительные методы диагностики. Разработка и внедрение диагностических тестов на основе молекулярных методов, включая полимеразную цепную реакцию (ПЦР) и перспективные технологии изотермической амплификации, позволит значительно сократить время получения результатов и повысить эффективность выявления возбудителей НП, обладающих генами карбапенемаз.

Цель проведение сравнительной оценки эффективности нового теста на основе петлевой изотермической амплификации (LAMP) для выявления генов карбапенемаз групп NDM, OXA-48 и KPC, используемых в практике лабораторной диагностики тестов на основе полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме реального времени при применении их в диагностике нозокомиальных инфекций нижних дыхательных путей, в том числе нозокомиальной пневмонии.

Материалы и методы. В исследование включён 141 образец биоматериала из нижних дыхательных путей от 107 пациентов с нозокомиальной инфекцией нижних дыхательных путей (нозокомиальной пневмонией и/или гнойным трахеобронхитом). Биоматериал представлял из себя аспират из трахеи (ТА, n=78), бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ, n=29) и мокроту (n=34). Нуклеиновые кислоты выделяли с использованием набора «АмплиТест® РИБО-преп». Гены NDM, OXA-48 и KPC анализировали с помощью разработанного набора реагентов «АмплиТест® CP NDM/OXA-48/KPC LAMP» на основе метода петлевой изотермической амплификации. Для сравнения результатов применяли метод ПЦР в режиме «реального времени» с использованием наборов реагентов «АмплиСенс® MDR MBL-FL» и «АмплиСенс® MDR KPC/OXA-48-FL».

Результаты. Получены совпадающие результаты выявления генов карбапенемаз групп NDM, OXA-48 и KPC в образцах биоматериала из нижних дыхательных путей при использовании нового теста на основе изотермической амплификации и с помощью ПЦР-тестов для всех исследованных образцов. С помощью критерия TTP (Time to positivity — время до положительного результата) показано ускоренное время получения результата LAMP в сравнении с ПЦР. С помощью дополнительных ПЦР-тестов были определены грамотрицательные микроорганизмы, присутствующие в исследуемых образцах (как в индивидуальной, так и в смешанной форме).

Заключение. Согласно полученным результатам, эффективность выявления генов карбапенемаз указанных групп с помощью нового теста на основе LAMP не уступает эффективности их выявления с помощью ранее внедрённых в практику ПЦР-тестов.

Клиническая лабораторная диагностика. 2024;69(9):198-209
pages 198-209 views

Испытания разработанного набора реагентов для выявления возбудителей кишечных инфекций методом изотермической амплификации ДНК

Давыдова Е.Е., Толоконцева А.А., Лупарев А.Р., Полякова В.А., Григорьева Т.Д., Шипулин Г.А.

Аннотация

Обоснование. Изотермическая петлевая амплификация LAMP (Loop-Mediated Isothermal Amplification) — перспективный для диагностики инфекционных заболеваний метод, имеющий высокий потенциал перехода к формату тестов «у постели больного». Он применяется для обнаружения широкого спектра возбудителей инфекционных заболеваний, однако подобные тесты для выявления возбудителей кишечных инфекций в Российской Федерации практически отсутствуют.

Цель — испытания диагностического набора реагентов для выявления ДНК возбудителей кишечных инфекций Shigella spp., энтероинвазивных E. coli, Salmonella spp., термофильных Campylobacter и кишечных аденовирусов группы F методом LAMP.

Материалы и методы. Использовали в качестве мишеней для амплификации фрагменты генов ipaH Shigella, invA Salmonella, CJE0832 кампилобактерий C. jejuni и C. coli, гена белка гексона аденовируса F 40. Клинические образцы получали от пациентов с характерными симптомами диареи и от пациентов без симптомов, всего 254 образца. Для приготовления экстракта кала готовили 10% суспензию в фосфатно-солевом буфере, осаждали твёрдые частицы. Для выделения ДНК из экстрактов использовали наборы реагентов «АмплиТест® Рибо-Преп» (РУ № РЗН 2020-12985, 22.12.2020) и «АмплиТест® Магно-Сорб-Комбо» (РУ № РЗН 2022_19200, 21.12.2022) производства ФГБУ «ЦСП» ФМБА России. Результаты амплификации детектировали с использованием специфических флуоресцирующих зондов, амплификацию проводили в мультиплексном формате с использованием двух смесей, первая из которых позволяет выявлять ДНК Shigella и EIEC, Campylobacter и ВКО, а вторая — ДНК аденовирусов группы F и Salmonella.

Результаты. Аналитическую чувствительность оценивали на модельных образцах биоматериала, содержащих ДНК целевых мишеней с известной концентрацией. Показано, что ДНК Shigella, EIEC, Salmonella, Campylobacter и аденовирусов группы F воспроизводимо выявляется в концентрации не менее 5×103 копий/мл (общее количество повторов n =60). Cпецифичность подтверждена на панели ДНК штаммов аденовирусов различных типов и ДНК бактериальных штаммов. При исследовании 254 клинических образцов показано совпадение результатов, полученных разработанным протоколом на основе LAMP и методом ПЦР (набор сравнения «АмплиСенс® ОКИ-скрин-FL»). Диагностическая чувствительность LAMP протокола составила не менее 92,6%, специфичность — не менее 98,2% с учётом доверительной вероятности ( p =0,95). Высокие аналитические и диагностические характеристики разработанного набора реагентов «АмплиТест® OKI LAMP» были подтверждены при проведении клинико-лабораторных испытаний, набор зарегистрирован в качестве медицинского изделия для диагностики in vitro (РУ РЗН 2024/23503 от 04.09.2024).

Заключение. Разработанный набор реагентов на основе LAMP позволяет выявлять кишечные патогены за время, не превышающее один час, и имеет аналитические и диагностические характеристики, сравнимые с ПЦР.

Клиническая лабораторная диагностика. 2024;69(9):210-220
pages 210-220 views

Краткие сообщения

Создание депозитария образцов ротовой жидкости. Опыт биобанка Уральского государственного медицинского университета

Максимова А.Ю., Кудрявцева Е.В., Полушина Л.Г., Копенкин М.А., Базарный В.В.

Аннотация

Биобанк — это уникальная платформа для современных прикладных и фундаментальных биомедицинских исследований. Данное подразделение занимается не только хранением биологических образцов, но и систематизацией клинической, лабораторной информации по каждой пробе. В 2023 г. было принято решение сформировать биобанк на базе Центральной научно-исследовательской лаборатории Уральского государственного медицинского университета. Для начала было необходимо выбрать один тип биоматериала для создания коллекции и ассоциированной с ней информации. Поскольку нашим коллективом длительное время изучались биомаркеры ротовой жидкости, было принято решение создать первую коллекцию из образцов указанного биоматериала.

Цель настоящей работы — представление опыта организации университетского биобанка на основе создания коллекции образцов ротовой жидкости. В статье рассматриваются основные этапы создания и функционирования биобанка, описываются методы пробоподготовки ротовой жидкости, а также приводится статистика собранных коллекций. На сегодняшний день преобладающая часть депозитария состоит из образцов ротовой жидкости условно здоровых пациентов и пациентов с различной патологией. На биоматериале из собранных коллекций биобанка выполнялись исследования по поиску прогностических биомаркеров различных патологических состояний.

Таким образом, университетский биобанк — это возможность для сотрудников университета, которая поможет повысить качество и воспроизводимость научно-исследовательских работ и клинико-экспериментальных проектов.

Клиническая лабораторная диагностика. 2024;69(9):221-227
pages 221-227 views